Soalan dan jawapan biasa dalam penyediaan larutan guanidine tiosianat

Guanidine thiocyanate adalah denaturant protein yang kuat. Ia tidak hanya dapat melarutkan protein dengan cepat, menyebabkan fragmentasi struktur sel, dan memisahkan protein nuklear dari asid nukleik dengan cepat kerana pemusnahan struktur sekunder, tetapi juga mempunyai kesan denaturasi yang kuat pada RNases. Oleh itu, guanidine thiocyanate dapat digunakan sebagai denaturant untuk melancarkan sel, memisahkan RNA dari protein, dan melepaskan RNA ke dalam larutan. Walau bagaimanapun, beberapa masalah sering dihadapi dalam penyediaan dan penggunaan larutan guanidine thiocyanate. Makalah ini akan menjawab masalah ini satu persatu.

Adakah larutan guanidine thiocyanate perlu digunakan dan disediakan sekarang?

Kepekatan akhir guanidine tiosianat ialah 4m sebagai contoh: 42mm natrium sitrat, 0.83% n-Lauryl sarcosine (natrium dodecyl, n-methylglycine), 0.2mm β- Penyediaan penampan CSB daripada mercaptoethanol; 25g guanidine tiosianat dan 33ml larutan penimbal CSB dicampur sehingga larut sepenuhnya. Larutan denaturasi boleh disediakan dengan memanaskan dan melarutkan pada suhu 65℃ dan disimpan di 4℃ untuk standby.

Oleh itu, penyelesaian guanidine thiocyanate tidak perlu digunakan dan disediakan sekarang, dan terdapat penyelesaian dengan kepekatan yang berbeza di pasaran pada masa ini, tetapi masa penyimpanan tidak mudah terlalu lama, jika tidak, akan ada curah hujan, yang perlu diperiksa dengan teliti sebelum digunakan; Di samping itu, jika terdapat terlalu banyak persiapan sekali, disarankan untuk mengemas semula.

Adakah larutan guanidine tiosianat memerlukan pensterilan selepas penyediaan?

Tidak perlu untuk mensterilkan larutan tiosianat guanidin, yang tidak terlalu stabil, dan 0.1% air DEPC umumnya digunakan dengan larutan pirolisis, dan air telah disterilkan. Sebagai tambahan, semua reagen untuk mengekstrak RNA perlu disiapkan dengan air DEPC, dan reagen harus baru dibuka dan digunakan secara eksklusif untuk RNA.

Walaupun lisat yang disiapkan tidak perlu disterilkan, perlu diperhatikan bahawa produk plastik yang digunakan dalam eksperimen telah ditandakan bebas RNase. Sekiranya belum dibuka untuk digunakan, ia boleh digunakan secara langsung. Yang lain mesti dirawat: tambahkan DEPC ke dalam air suling berganda untuk membuat kepekatan akhir 0.1%, rendam produk plastik di dalamnya, ventilasi dapur semalaman, dan kemudian tutupnya dengan aluminium foil, suhu tinggi dan pensterilan tekanan tinggi sekurang-kurangnya 30 minit, kering dan siap sedia.